附录A 规范性附录.细菌定量杀灭试验A,1.试验原理 将规定浓度的细菌悬液以一定比例与酸性电解水混合.作用至规定的时间后加入中和剂。终止酸性电解水的杀菌活性,进行活菌计数，然后与阳性对照组细菌悬液中的菌落数进行比较，以确定其杀菌效果，A、2、悬液定量杀菌试验A,2.1、菌悬液的制备A。2、1,1、按,消毒技术规范,2002年版。要求将细菌繁殖体和枯草杆菌黑色变种芽孢制成2,109CFU mL,9.109CFU,mL的试验用菌悬液 A。2,1.2、按，消毒技术规范、2002年版，要求将白色念珠菌制成2、108CFU,mL、9。108CFU、mL的试验用菌悬液 A,2、2、悬液定量杀菌试验操作程序A、2 2.1，开启生成器 待产生的酸性电解水中有效成分处于稳定状态时.用250mL磨口锥形瓶接取满瓶后.盖好瓶盖、置20,1。水浴备用、A。2 2、2 取消毒试验用无菌大试管 先加入0。05mL试验用菌液。再加入0,05mL有机干扰物质，混匀、置20,1，水浴中5min后。用无菌吸管吸取酸性电解水9,9mL注入其中,迅速混匀并立即计时。A 2、2,3,待试验菌与消毒剂相互作用至各预定时间,分别吸取0，5mL试验菌与酸性电解水的混合液加于含4。5mL中和剂。0,1 硫代硫酸钠.0 1、吐温80的生理盐水，的试管中 混匀.作用10min后,分别吸取1 0mL样液,按活菌培养计数方法测定存活菌数、每管样液接种2个平皿，如平板上生长的菌落数较多时 可进行系列10倍稀释后。再进行活菌培养计数.A、2 2，4 同时用标准硬水代替酸性电解水、进行平行试验.作为阳性对照。A，2 2。5.所有试验样本均在37 温箱中培养 对细菌繁殖体培养48h观察最终结果。对细菌芽孢和白色念珠菌需培养72h观察最终结果、A、2.2，6、试验重复3次 包括对照.计算各组的活菌浓度，CFU，mL 并换算为对数值 N，然后按式。A，1,计算杀灭对数值。A、2,3.杀灭对数值的计算.计算各组的活菌浓度。CFU,mL,并换算为对数值。N.然后按式.A.1。计算杀灭对数值 KL，N0 Nx,A.1 式中。KL。杀灭对数值,N0 对照组平均活菌浓度的对数值。Nx。试验组活菌浓度对数值 计算杀灭对数值时，取小数点后两位值.可以进行数字修约.但是,如果消毒试验组消毒处理后平均生长菌落数小于1CFU。杀灭对数值即大于或等于对照组平均活菌浓度的对数值。KL lg。N0、A，2.4，评价规定，取酸性电解水原液与3个作用时间 重复试验3次、在最短作用时间、以及最短作用时间的1，5倍时 对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌。枯草杆菌黑色变种芽孢，各次试验的杀灭对数值均,5,00 对白色念珠菌 各次试验的杀灭对数值均，4,00、判定为消毒合格。A 2 5。注意事项A、2、5.1.试验中所使用的中和剂。稀释液和培养基等。各批次均应进行无菌检查，发现有菌生长.则全部试验需换用未污染试剂或培养基重做 A。2 5。2.进行细菌液定量杀菌试验时。对用于清洗物品的消毒或用于冲洗浸泡消毒 有机干扰物质采用0.3.3g、L,牛血清白蛋白,对未清洗的物品或有机物较多的物品的消毒 有机干扰物采用3.30g,L，牛血清白蛋白.