附录A.规范性附录.灭菌效果检测方法A.1 方法原理,本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔 软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔,验证微生物的灭菌效果 本试验应采用两端开口的无缝测试管腔,如有接缝,则应保证气密性，在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体。通过半周期灭菌循环 无菌生长，以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌，同时进行微生物灭菌效果评价、所有试验均为阴性培养结果 则判定结果合格,A 2.生物指示物.嗜热脂肪杆菌芽孢。ATCC7953 A.3.验证器材A。3，1,载体、将芽孢液均匀涂布在直径为0、4mm.长度为20mm,30mm不锈钢检测材质上,以染菌后不堵塞管腔为限。嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1。106CFU.载体。5,106CFU 载体，室温下自然干燥后再使用。A、3 2,检测管腔、本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔、如有接缝.则应保证气密性，A，3 3.不锈钢材质无接缝管腔.10根 A，3，4。聚四氟乙烯无接缝管腔、10根 A，3 5.嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基 干粉胰蛋白胨17,0g。植物蛋白胨3，0g，氯化钠5。0g.磷酸氢二钾2,5g 葡萄糖2，5g 共30g溶于1L蒸馏水中,制成胰蛋白胨大豆肉汤.TSB，培养基、A。4 操作步骤A 4、1.将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央 制作10根测试样本.将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内 用双层无纺布包裹。放置在灭菌舱内,灭菌舱内如仅一层隔架。则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央.见图A 1 若灭菌舱内可摆放上下两层隔架、则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内，分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央、见图A,2 按照。消毒技术规范.2002版.中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌.灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体，均放到TSB培养基中，56,培养48h。观察培养结果.如无细菌生长则继续培养至7d，培养结果仍无细菌生长则判断为阴性、A，4，2,将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间、制作10根测试样本,将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内、用双层无纺布包裹,放置在灭菌舱内.灭菌舱内如仅一层隔架，则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央.见图A。3。若灭菌舱内可摆放上下两层隔架,则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内。分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央。见图A、4、按照,消毒技术规范,2002年版,中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌。灭菌结束后取出细菌芽孢载体,全部放到TSB培养基中.56,培养48h,观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d、培养结果仍无细菌生长则判定阴性。A.5，结果计算，嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔.微生物测试各重复5次,A，6，结果判定、测试结果均无细菌生长、为阴性，则判定无菌合格,